1．准备各种液体

　　(1)洗涤液2个30mm培养皿(Falcon 3001)或4个孔的培养(Nuncon：)，加入0．8～2ml 10％血清Eade’s培养液。 
 

　　(2)受精液(insemination medium，IM)  4孔：Nunclon培养皿中每孔加入0．8ml或制成数个10％d的10％血清Earle’s液于(falcon 3002)平皿中微滴，表面用石蜡油覆盖。

　　(3)生长液(growth medium，GM)  与受精液同样配制。各种培养液制备完成后，都应放入5％c02，370C培养箱内平衡，以保证pH及渗透压稳定。

　　2．收集卵母细胞

　　(1)用10ml试管(Falcon 2001)收集卵细胞迅速将卵泡液倒入培养皿内(I~alcon3003)，置实体解剖镜下(15×)，先用肉眼观察可看到一个灰色透亮的粘液团块，被称为卵一冠一丘复合物(OCCC：)，再在解剖镜下观察，确认是否有卵母细胞存在。

　　(2)根据OCCC的形态学如颗粒细胞大小及分散度等判断卵细胞成熟度。

　　O级：无卵丘结构，可见放射冠或第一极体。

　　工级：很薄的卵丘和(或)放射冠围绕在透明带周围，见第一极体

　　Ⅱ级：中等大小的卵丘结构，细胞松散，放射冠界限清晰。

　　Ⅲ级：卵丘结构大而松散，放射冠薄分界不清。

　　(3)将收集到的卵一冠一丘复合体OCCC放入洗涤液内，冲洗两次，去除周围的红细胞，并转移至IM液中，置5％C02及370C培养箱内培养4～6小时，使卵母细胞进一步成熟。

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